カバーグラスのポリ−L−リジン・コーティング

前回のエントリーからしばらく経ってしまいましたが、細胞の免染プロトコールとして、
今回はカバーグラスのポリ−L−リジン・コーティングについて説明します。
この操作は接着の弱い細胞を免染する際に必要となります。

＜用意するもの＞
・滅菌した18 mm×18 mmカバーグラス（滅菌法：耐熱ガラス製のペトリ皿にカバーグラスを入れてフタをした後、アルミホイルをかぶせてオートクレーブで滅菌。乾燥機で乾かしてから使用。ペトリ皿が無い場合は、使い古しの50mLチューブにカバーグラスをいれ、フタをゆるく閉める。そして、チューブ全体をアルミホイルで包んで、オートクレーブする。）

・0.01% ポリ−L−リジン　(シグマ・アルドリッチ : P4832)　 他社の同等品でも可

・PBS(-)　普段の細胞培養に用いるPBS(-)をそのまま使えばよい


（以下の作業は全て、クリーンベンチ内で行う）
1. 滅菌済カバーグラスをピンセット*で、35mmディッシュ内に置く。
(35mmディッシュの代わりに6ウェルプレートでも可)

*ピンセットは適宜、バーナーで炙って滅菌状態を維持すること。

2. 滅菌MilliQ水で10倍希釈したポリ−L−リジンをカバーグラスに130-150 uL程度のせ、ピペットのチップを使ってカバーグラス全体に広げる。その後、ディッシュにフタをして常温で20-30分間静置する。
（ポリ−L−リジンの希釈液は用事調整ではなく、作り置きしてもよい。一度に数mL調整し、15mLチューブなどに入れて冷蔵庫で保存する。10日間程度なら問題なく使用できる。）

3. アスピレーターでポリ−L−リジンの希釈液を吸い取る。
4. PBS(-)で3,4回リンスする。
5. 細胞を播種する。

このプロトコールでは、0.01%ポリ−L−リジンを10倍希釈して使用しています。希釈しないプロトコールもありますが、希釈した場合でも多くの細胞は問題なく接着します。また、ポリ−L−リジンは細胞毒性があるため、まずは希釈して使ってみることをおすすめします。

カバーグラスは、ポリ−L−リジンでコーティングした後、滅菌MilliQ水で十分にリンスし、乾燥させてから保存することもできます。ただし、上記のように用事調整しても、2の待ち時間に細胞の継代などをすることで、時間を無駄にせずにコーティングすることができます。保存中のコンタミリスクなどを考えれば、用事調整することをおすすめします。